如何8小时内在单块孔板中筛选上百万个B细胞？

生物制药离不开生物制药设备和生物抗体研发，其中抗体是理想的治疗性生物大分子，不但能与各种靶点结合，且具有高亲和力和特异性。随着杂交瘤和噬菌体展示技术的创新，药物研发人员能够利用抗体的天然多样性，广泛使用单克隆抗体（mAbs）治疗癌症、慢性炎症和传染病。

作为抗体开发上游的关键技术环节，单B 细胞分选技术已经有了显著发展，并成为获取抗原特异性mAb 序列的主要来源。然而，这一技术仍然面临诸多挑战，如：开发效率低、成本高昂等问题。

CellCelector Flex全自动无损细胞分离系统结合纳米孔阵列技术，能够高通量评估和验证大量克隆，使用单一平台即可对成千上万个B细胞克隆进行扫描成像、分泌物鉴定、产量分析和自动靶细胞分离的完整流程，将传统方法数周的工作高效压缩为一个工作日内，优化抗体发现流程。

1.高效可靠的新型单细胞分离技术

基于纳米孔阵列和图像验证的高通量克隆筛选（HT-NIC）技术基于CellCelector纳米孔板，每个大孔底部都有多达数十万个纳米孔，能够有效地对成千上万个单细胞进行分离，同时确保细胞被相同的培养基覆盖，因此可以共享生长因子，在共培养环境下更容易生长至克隆。

2.全面加速的B细胞筛选流程

3.灵活经济的B细胞筛选方案

CellCelector单细胞分选仪支持明场、相差以及蓝色、绿色、红色、远红外和近红外荧光通道成像以进行分泌物多重分析。对纳米孔板中的单个细胞进行单细胞分泌分析，能够快速识别理想的分泌细胞。CellCelector B细胞工作流程支持多种细胞分析策略，包括使用抗原包被孔板、加入微球或抗原表达报告细胞的分析策略。

图1. CellCelector B细胞工作流程和基于纳米孔的分泌测定示意图

CellCelector B细胞筛选可使用H100型（六边形）纳米孔板，每个大孔包含60,000个纳米孔，且具有无细胞毒性和低黏附性的特点，防止细胞附着，不受细胞的粘附性或悬浮条件优化的影响，可有效分离单个B细胞并进行分泌物检测。

图2. H100六边形纳米孔板

图3. 孔板内包被抗原的B 细胞分泌分析方案

图4. 微球和报告细胞的单B 细胞筛选方案

4.可视化筛选和挑取过程

使用CellCelector 分离和表征原代B细胞。使用明场和荧光扫描52,000个纳米孔，鉴定含有分泌抗体（AF647+）的B细胞且对EGFR结合呈阳性（AF488+）的B细胞纳米孔。（A）荧光特异性647nm发射的图像（红色）；含有抗体分泌细胞的两个邻近孔可以观察到三个红色荧光孔，表示它们分泌了目标抗体（ASC）。（B）荧光特异性488nm发射的图像（绿色）；一个含有EGFR特异性ASC的邻近孔两个绿色的孔代表其分泌物能够和EGFR结合。（C）来自647和488nm通道的图像叠加和（D）用于挑取EGFR+ASC的明场图像。从纳米孔挑取EGFR+ASC之前和之后的明场图像（E）和（F）挑取前后的明场图像显示纳米孔内所有的内容物均已挑取。

图5. 细胞分泌分析示例

总结